شفق هيثم عباس *1، شهد حيدر حنو2، محمد ج. الجساني
1قسم الأحياء الدقيقة، كلية العلوم، جامعة الكرخ، بغداد / العراق
2القسم، كلية، جامعة التراث، بغداد / العراق
*المؤلف المقابل: .. shafaqhaitham121@gmail.com
خلاصة
الخلفية: يتميز مرض التمثيل الغذائي طويل الأمد المعروف باسم داء السكري (DM) بارتفاع السكر في الدم المستمر. اعتمادا على العدوى الجهازية أو المحلية، قد يكون مرضى السكري أكثر عرضة للإصابة بأنواع المبيضات.
الهدف: وبالتالي، كان الهدف من البحث الحالي هو تحديد السمات الجديدة في التوزيع والانتشار والقابلية لمضادات الفطريات Candida spp. معزولة عن مرضى السكر . نحن قادرون على تقييم التحول في أنماط الحساسية المضادة للفطريات في Candida spp المعزولة بفضل التحقيقات.
الطرق: خلال هذه الدراسة تم جمع 36 عينة من مريض مصاب بالسكري. تم عزل وتحديد هوية خميرة المبيضات في CHROMagar. تم إجراء حساسية المضادات الحيوية باستخدام المضادات الحيوية فلوكونازول، نيستاتين، إيتراكونازول، أمفوتيريسين ب، كلوتريمازول، كيتوكونازول.
النتائج : 17 عينة لم تظهر أي ثقافة لأي خميرة . 19 عينة كانت إيجابية لنمو الخميرة. تم التعرف على ثلاثة المبيضات مختلفة. بنسبة 75%، كانت المبيضات البيضاء، والمعروفة أحيانًا باسم المستعمرات الخضراء، هي الأنواع الأكثر شيوعًا.
الاستنتاجات: توصلت الدراسة الحالية إلى وجود علاقة بين النتائج السريرية والميكروبيولوجية مثل عزل المبيضات بين مرضى السكري والتي قد تكون سببية. يعد تحديد أنواع المبيضات مع نمط الحساسية المضادة للفطريات في المختبر أمرًا ضروريًا لاختيار الدواء المضاد للفطريات المناسب والتنبؤ بنتائج العلاج.
الكلمات المفتاحية: المبيضات، مرضى السكري، تحديد الهوية
مقدمة
داء السكري (DM) هو مرض أيضي مزمن يتميز بارتفاع السكر في الدم الذي لا يختفي. يمكن أن يحدث بسبب مقاومة نشاط الأنسولين المحيطي، أو عدم كفاية إفراز الأنسولين، أو كليهما. اعتمادًا على ما إذا كان مرضى داء السكري مصابين بعدوى جهازية أو محلية، هناك عدد من العوامل التي تساهم في زيادة الاستعداد للإصابة بالمبيضات. (جها وآخرون، 2021).
تعد أنواع المبيضات سببًا رئيسيًا لمرض المبيضات في الدم وكان يُعتقد سابقًا أنها ملوثات ثقافية (محمدي وآخرون، 2016). من المعروف منذ زمن طويل أن المرضى الذين يعانون من داء السكري غالبًا ما يصابون بعدوى المبيضات (ويليس وآخرون، 1999). أظهرت العديد من الدراسات أن الأشخاص المصابين بداء السكري لديهم معدل انتشار أعلى للخمائر مقارنة بالأشخاص الأصحاء والطبيعيين (Ferlay et al., 2015).
ومع ذلك، يمكن أيضًا أن يصاب الأشخاص غير المصابين بالسكري بداء المبيضات إذا ضعفت أجهزتهم المناعية مؤقتًا بسبب الإجهاد أو الكحول أو فيروس نقص المناعة البشرية في حالة مرضى التهاب الكبد الوبائي (فير وآخرون، 2014). بالإضافة إلى ذلك، فإن بعض الأفراد المصابين بداء المبيضات يتناولون أيضًا المضادات الحيوية، حيث أن هذه الأدوية تدمر الكائنات الحية الدقيقة وتسمح بتواجد المبيضات. ليأخذوا مكانهم (سارة وآخرون، 2017). يتم علاج عدوى المبيضات في الفم والحلق بأدوية مضادة للفطريات ذات سمعة طيبة ومراقبة المريض المستمرة. يمكن أن تظهر الأعراض التالية: آفة في الفم تشبه الجبن، بالإضافة إلى بقع بيضاء كريمية ناعمة داخل الخدين وعلى اللسان. على الحلق، وعدم الراحة وصعوبة البلع، والتهاب المريء، والمزيد من الأعراض (Jayachandran et al., 2016).
في الوقت الحالي، طورت سلالات معينة من المبيضات مقاومة لفئة الأدوية الآزولية، خاصة لدى مرضى السكري (Delsing et al., 2021) (تظهر مقاومة الأدوية لدى الأفراد المصابين بالسكري كسبب مهم للقلق.
ونتيجة لذلك، أصبح من الأهمية بمكان الآن مراقبة نمط الحساسية المضادة للفطريات بشكل دوري للأنواع الأكثر شيوعًا من المبيضات. وبالتالي، كان الهدف من البحث الحالي هو تحديد السمات الجديدة في التوزيع والانتشار والقابلية لمضادات الفطريات Candida spp. معزولة عن مرضى السكر . يمكننا تقييم التحول في أنماط الحساسية المضادة للفطريات في Candida spp المعزولة بفضل التحقيقات.
المواد والطرق
جمع العينات
تم جمع ستة وثلاثين عينة من عينات الشفاه وبطانة الشدق من مريض سكري في بغداد العراق، 42% من المرضى يعانون من نوعين من مرض السكري. تم جمع العينة في وسط النقل Amis (هيميديا، الهند) وحفظها عند درجة حرارة 4 درجات مئوية حتى إجراء الاختبارات.
ثقافة الخميرة الفموية وعزلها
تم زراعة المسحات مباشرة على CHROMagar (هيميديا، الهند) للتعرف على الخميرة وضمان نقاء الثقافة وفقا للون المستعمرات. تم تحضين الأطباق لمدة أربع وعشرين ساعة عند 37 درجة مئوية.
اختبار الحساسية للخميرة المعزولة
تم تقييم حساسية عزلات الخميرة باستخدام أنواع مختلفة من مضادات الفطريات شائعة الاستخدام: فلوكونازول، أمفوتيريسين ب، نيستاتين، كيتوكونازول، فوريكونازول، وكلوتريمازول وعلى النحو التالي:
تم استزراع مستعمرة واحدة من كل طبق متتالي في مرق مولار هينتون 3 مل طوال الليل عند 37 درجة مئوية. في طبق أجار مولار هينتون، تم نشر 1 مل من محلول الخميرة (0.5 ماكفارلاند)، وتركه لمدة دقيقة واحدة. تم وضع أقراص المضادات الحيوية على الثقافة. تم تحضين الأطباق لمدة يوم كامل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. وتم قياس قطر المثبط لكل قرص يحتوي على مستخلصات مخففة، ثم تمت مقارنته بالأقراص الأخرى التي تحتوي على مضادات حيوية ومستحضرات للعناية بصحة الفم والأسنان.
تم استزراع مستعمرة واحدة من كل طبق متتالي في مرق مولار هينتون 3 مل طوال الليل عند 37 درجة مئوية. في طبق أجار مولار هينتون، تم نشر 1 مل من محلول الخميرة (0.5 ماكفارلاند)، وتركه لمدة دقيقة واحدة. تم وضع أقراص المضادات الحيوية على الثقافة. تم تحضين الأطباق لمدة يوم كامل عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. وتم قياس قطر المثبط لكل قرص يحتوي على مستخلصات مخففة، ثم تمت مقارنته بالأقراص الأخرى التي تحتوي على مضادات حيوية ومستحضرات للعناية بصحة الفم والأسنان.
النتائج والمناقشة
لم تظهر 17 عينة أي ثقافة لأي خميرة. 19 عينة كانت إيجابية لنمو الخميرة . تسعة منها تحتوي على عدد قليل جداً من المستعمرات (الخضراء) بينما أظهرت 10 منها نمواً ضعيفاً وبعضها ثقافات مختلطة الجدول (1) والشكل (1). تم عزل أنواع مختلفة من Candida spp . المبيضات البيضاء (المستعمرات الخضراء) هي الأكثر شيوعاً، حيث تمثل 75% من العزلات الفطرية، وهذا يتفق مع (Willis et al.1999).
أصبح اختيار دواء مضاد للفطريات أكثر صعوبة بسبب التحول في مسببات داء المبيضات الفموي من المبيضات البيضاء، وهي الأنواع التي يتم مواجهتها بشكل متكرر، إلى غير المبيضات البيضاء مثل C. glarata و C. krusei، الأنواع الأكثر مقاومة للأدوية بشكل جوهري ( ماكينين وآخرون. 2018).
اختبار الحساسية
يتم عرض نتائج اختبار الحساسية لعزلات الخميرة أثناء التحري في الجدول (2). أظهرت النتائج أن جميع العينات كانت حساسة بشكل متوسط للكيتوكونازول والفوريكونازول والكلوتريمازول مع حساسية ضعيفة جداً للأمفوتريسين ب الجدول (2) والشكل (2أ). أظهرت عينة واحدة فقط (28) مع مزيج من بكتيريا C.tropicalis وC.albicans مقاومة لجميع المضادات الحيوية التي تم اختبارها الشكل (2ب). أحد أدوية الخط الأول لعلاج داء المبيضات في الفم لدى مرضى السرطان هو الفلوكونازول (Delsing et al.، 2021؛ Mäkinen et al.، 2018). العلاج القياسي لعدوى المبيضات واسعة النطاق هو الأمفوتريسين ب. أصبحت الالتهابات الفطرية أكثر شيوعًا لدى الأشخاص الذين يعانون من ضعف في جهاز المناعة، بما في ذلك مرضى السكري الذين يتلقون العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي (Delsing et al.، 2021). إن جفاف الغشاء المخاطي للفم الناجم عن العلاج السام للخلايا يجعل من السهل على العديد من البكتيريا إصابة المرضى. وفقا للدراسات، فإن مرحلتي تطور داء المبيضات هما الاستعمار ثم غزو الطبقة الظهارية (Delsing et al.2021، Bombeccaria et al.2016). بمجرد إنشاء الاستعمار، قد يتم غزو الطبقة الظهارية بسبب ضعف المناعة الخلوية. سيؤدي العلاج الكيميائي والإشعاعي وقلة العدلات إلى التهاب الغشاء المخاطي، مما سيؤدي إلى تمزق الغشاء المخاطي والسماح للمبيضات بالغزو بشكل أعمق (Delsing et al., 2021). تعد مقاومة مضادات الفطريات في أنواع المبيضات مصدر قلق كبير، خاصة عند مرضى السكري، حيث أن هذه العزلات المقاومة للأدوية لديها القدرة على الانتشار إلى الأنسجة العميقة والتسبب في العدوى. بسبب كثرة المبيضات في أفواه وحلق مرضى السرطان الذين يتلقون العلاج الكيميائي أو العلاج الإشعاعي، فإن المراقبة الشهرية المنتظمة للعدوى الفطرية ضرورية لتحديد أنماط المقاومة المضادة للفطريات.
قد يؤدي العلاج الكيميائي المكثف إلى تطوير ميكروبات مقاومة للأدوية. أضف إلى ذلك أن وجود مثل هذه الميكروبات قد يساهم في بداية الإصابة بمرض السكري وتطوره (Jayachandran et al.2016). وفقًا لدراسات متعددة (Mäkinen et al.2018, Bombeccaria et al.2016)، يتراوح معدل الإصابة بعدوى المبيضات في سرطان الخلايا الحرشفية الفموية في منطقة الرأس والرقبة من 25% إلى 74.7%. يرتبط وجود المبيضات في هذه الأورام بسوء التشخيص.
الجدول 1: تحديد أنواع الخميرة في وسط CHROMagar
Code
Species
Color on CHROMagar
2
Candida albicans
Green
9
C. albicans
Green
14
C. albicans
Green
16
C. albicans
Green
23
C. albicans
Green
25
C. albicans
Green
30
C. albicans
Green
31
Candida albicans
Green
32
C. albicans
Green
3
C. krusei
purple
7
C. krusei
purple
15
C. krusei
purple
18
C. krusei
purple
24
C. krusei
purple
26
C. krusei
purple
27
C. krusei
purple
29
C. krusei
purple
8
C. glabrata
pink
21
C. glabrata
pink
الشكل 1: في وسط CHROMagar، يتم عرض الخميرة المعزولة (A: C. Krusei، B: C. glabrata، وC: C. albicans)
الجدول 2: تقييم حساسية الخميرة المعزولة
NO.
Antibiotic
Mean Inhibition zone diameter (mm)
1
Amphotericin B (AMB)
7
2
Ketoconazole (KCA)
14
3
Clotrimazole (CLO)
17
4
Nystatin (NY)
–
5
Itraconazole
7
6
Fluconozol (FLU)
_
الشكل 2: نتائج اختبار الحساسية
الاستنتاجات
العدوى الفطرية السائدة بين مرضى السكري الذين يتلقون العلاج الكيميائي هي داء المبيضات الفموي. في بعض الحالات، يمكن أن يساعد الارتباط بين النتائج السريرية والميكروبيولوجية في ربط أعراض معينة بعزل المبيضات لدى مرضى السكري؛ ومع ذلك، قد تكون هذه الارتباطات سببية. نمط الحساسية المضادة للفطريات لكل من المبيضات البيضاء وغير المبيضات البيضاء هو نفسه. يحتاج اختيار الدواء المضاد للفطريات المناسب والتنبؤ بنتائج العلاج إلى تحديد مستوى الأنواع باستخدام نمط المقاومة المضادة للفطريات في المختبر.
شكرًا وعرفانًا
نتقدم بالشكر الجزيل لجميع الأشخاص الذين تبرعوا بعيناتهم البديلة لاعتماد التحليل ولجميع كادر المختبر من الفنيين الطبيين في مستشفى واسط وقسم المختبرات الطبية في الجامعة التقنية الوسطى.
تضارب المصالح
لا توجد مصالح متنافسة.
المراجع
- Jha, B. K., & Mahaseth, S. (2021). Candida species isolation, identification from Diabetics and their Antifungal Susceptibility Pattern. Janaki Medical College Journal of Medical Science, 9(2), 41-49.
- Mohammadi, F., Javaheri, M. R., Nekoeian, S., & Dehghan, P. (2016). Identification of Candida species in the oral cavity of diabetic patients. Current medical mycology, 2(2), 1.
- Willis, A. M., Coulter, W. A., Fulton, C. R., Hayes, J. R., Bell, P. M., & Lamey, P. J. (1999). Oral candidal carriage and infection in insulin‐treated diabetic patients. Diabetic medicine, 16(8), 675-679.
- Ferlay, J., Soerjomataram, I., Dikshit, R., Eser, S., Mathers, C., Rebelo, M., … & Bray, F. (2015). Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International journal of cancer, 136(5), E359-E386.
- Fair, R. J., & Tor, Y. (2014). Antibiotics and bacterial resistance in the 21st century. Perspectives in medicinal chemistry, 6, PMC-S14459.
- Whaley, S. G., Berkow, E. L., Rybak, J. M., Nishimoto, A. T., Barker, K. S., & Rogers, P. D. (2017). Azole antifungal resistance in Candida albicans and emerging non-albicans Candida species. Frontiers in microbiology, 7, 231851.
- Jayachandran, A. L., Katragadda, R., Thyagarajan, R., Vajravelu, L., Manikesi, S., Kaliappan, S., & Jayachandran, B. (2016). Oral Candidiasis among cancer patients attending a tertiary Care Hospital in Chennai, South India: an evaluation of Clinicomycological association and antifungal susceptibility pattern. Canadian Journal of Infectious Diseases and Medical Microbiology, 2016.
- Delsing, C. E., Bleeker-Rovers, C. P., Van De Veerdonk, F. L., Tol, J., Van der Meer, J. W. M., Kullberg, B. J., & Netea, M. G. (2012). Association of esophageal candidiasis and squamous cell carcinoma. Medical mycology case reports, 1(1), 5-8.
- Mäkinen, A., Nawaz, A., Mäkitie, A., & Meurman, J. H. (2018). Role of non-albicans Candida and Candida albicans in oral squamous cell cancer patients. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery, 76(12), 2564-2571.
- Bombeccaria GP, Spadaria F, Rossia M, Porrinia M, Bosottia M, Giannì AB. Biology of Candida spp. in potentially malignant disorders and carcinoma of the oral cavity. Dental Cadmos. 2016;84(10):624-34.
